品系来源 ：1921年 C.C.Little用 Lathrop小鼠作近亲培育时，用No7雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中将毛色呈黑色的进行固定，培育成C57BL。1937年Ltle将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL6，将第十组亚系定名为C57BL10，继而分别维持至今。1947年从 Little引入到美国 Jackson Lab，形成C57BL/6J:1951年从 Jackson Lab将第32代引入到NH，形成c57BL6N亚系；1974年 Charles River从NH引入并于1975年进行了剖腹产。六十年代从 Jackson Lab引入到日本实验动物中央研究所,1986年自日本实验动物中央研究所引入到中科院上海实验动物中心。2001年中国北京维通利华从美国 Charles River引入第59代核心群。
诱导方法：自制气管滴注导管，动脉导管( 内径0.28mm, 427401, BD Intramedic PE Tubing)，长度4cm，插入端加热制成一定弧度， 动物麻醉后颈前暴露气管，充分暴露喉部以及声门，配合冷光源的使用，可见光源由声门处透射出并随声门开合呈现闪烁感( Fig2A)；于声门张开瞬间，右手持导管向前上方平稳插入气管，有轻微突破感，拔出导丝，调整导管向左侧弯曲，缓慢向气管深处插入，深至距小鼠上门牙约2.8cm以确保导管末端置于左主支气管内，末端连接胰岛素注射器，向导管内缓慢推注0.1M浓度盐酸或生理盐水对照），推注过程大于10s，再补推注入约30倍液体体积的空气。竖直放置小鼠5min，术后小鼠给予保温措施等待苏醒，密切观察至72h，存活动物为成功造模动物。
模型表型数据
1.左肺弥漫性出血、渗出，而右肺损害不明显，
Fig1肺部大体解剖
2 肺泡灌洗液白细胞计数和蛋白浓度、肺湿干重比结果见表3~5。I) 盐酸组与生理盐水组比较，肺泡灌洗液中白细胞计数呈显著增加；除30 min时间点， HCl组与相对应的各个时间点NS组的比较，其差异有统计学意义(P＜0.05)，并在6 hHCl组达到峰值(P值＜0.01)。II ) 肺泡灌洗液蛋白浓度6 hNS组时BALF蛋白浓度出现轻度升高(P值＜0.05 vs 12 h组)；HCl刺激6 h时达峰值并明显高于6 h NS组及其它时间点HCl 组。III )左肺肺湿干重比值(W/D)在HCl刺激30 min时明显升高，12 h达峰值后呈下降趋势，至24小时进一步恢复。
Tab 3各组BALF WBC (×10^7/L x±s)
组别
30 min
2 h
6 h
12 h
24 h
NS
4.60±0.23
5.57±0.28
12.91±0.66 #▲
8.09±0.83
7.72±0.55
HCl
5.38±0.63
14.65±1.56*
27.81±1.56*#▲
19.41±0.51*
11.98±0.39*
*P值＜0.01 vs相应时间点NS组; #P值＜0.05 vs 2 h组; ▲P值＜0.05 vs 12 h组
Tab4各组BALF蛋白浓度 (μg/μl x±s)
组别
30 min
2 h
6 h
12 h
24 h
NS
1.76±0.30
1.43±0.23
2.39±0.12▲
0.95±0.25
1.19±0.10
HCl
6.52±0.47*
7.48±2.06
12.15±1.96*#▲
6.81±0.26*
5.77±0.10*
*P值＜0.01 vs相应时间点NS组; #P值＜0.05 vs 2 h组; ▲P值＜0.05 vs 12 h组vs 24 h组
Tab 5各组肺湿干重比 W/D (% x±s)
组别
30 min
2 h
6 h
12 h
24 h
NS
4.28±0.07
4.03±0.24
4.27±0.02
4.28±0.12
4.20±0.05
HCl
5.12±0.10*
4.81±0.06*
4.96±0.09*
5.94±0.23*#
5.68±0.19*
*P＜0.01 vs相应时间点NS组; #P值＜0.05 vs 6 h组
TNF-α、IL-6、IL-1β和NF-κB免疫印迹检测
NS组各时间点组肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β和NF-κB的蛋白表达量无显著差异，HCl组6、12和24 h显著升高( P值＜0.01 vs NS组)，在12 h HCl组达到峰值( P＜0.05 vs 6 h 、24 h HCl组，Fig2)；肺组织IL-6蛋白表达量比较HCl组30 min开始显著升高( P＜0.01 vs NS组)，6 h HCl组达到峰值( P＜0.01 vs NS组，P＜0.05 vs 30 min、24 h HCl组，Fig3)；肺组织IL-1β 蛋白表达量比较，HCl组30 min开始显著升高( P＜0.05 vs NS组)，在6 h HCl组达到峰值( P＜0.05 vs NS组，P＜0.05 vs 2 h、24 h HCl组，Fig4)；肺组织NF-κB蛋白表达量比较，HCl组30 min开始升高，在2 h、6 h和12 h HCl组表达量显著升高( P＜0.05 vs NS组，Fig5)。
Fig2 小鼠肺组织TNF-α表达水平 *P值＜0.05 vs NS组, #P值＜0.05
Fig3 小鼠肺组织IL-6表达水平 *P值＜0.05 vs NS组, #P值＜0.05
Fig4 小鼠肺组织IL-1β 表达水平 *P值＜0.05 vs NS组, #P值＜0.05
Fig5 小鼠肺组织NF-κB表达水平 *P值＜0.05 vs NS组
1.病理学结果及肺损伤评分
NS组各时间点肺组织观察可见肺泡结构完整、清晰，无损害( Fig6 )；30 minHCl 组的肺组织未见明显损害或轻微损害，肺泡结构较完整, 肺泡间隔无明显水肿，有少量炎性细胞浸润( Fig6B)；2 h HCl组，弥漫性肺泡壁增厚、红细胞渗出和炎性细胞浸润( Fig6D黑色箭头所示)；6 h HCl组，肺组织损害显著，肺组织弥漫性的出血、水肿，肺泡壁增厚、结构紊乱，部分肺泡萎陷不张( Fig6F黑色箭头所示)；12 h HCl组较6 h HCl组损害程度减轻，肺间质轻中度水肿，肺泡结构破坏程度以及炎性细胞浸润较6 h组减轻( Fig6H黑色箭头所示)；24 h HCl组，肺组织水肿充血程度仍然较重，与6、12 h组相比肺部炎症程度较轻( Fig6J黑色箭头所示)。HCl 组与NS组各个时间刺激点相比较， (除外30 min) 的肺组织病理损伤评分显著升高，且差异有统计学意义(P＜0.001)；并且HCl组，6 h HCl组肺损伤评分与2 h、12 h HCl组比较显著升高，且差异有统计学意义(P值＜0.05)。
Fig6小鼠肺病理学改变(H&E染色 ×400)
Fig7肺损伤评分 与NS组比较显著升高 *P值＜0.001；6h组与2 h、12 h HCl组比较显著升高 #P值＜0.05；
2023-12-21 15:24:25
