DOCA诱导主动脉瘤模型

1.C57小鼠，转基因动物（PSGL-1-KO小鼠） ，科学名称：C57，近交系（Inbred Rat）

品系来源 ：（1）遗传背景及亚系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配，而得C57BL6。亚系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因标记：aa、BB、CC（黑色）(3)主要遗传学特征：a.免疫学特征：一般饲养条件下免疫球蛋白的量随年龄而增加，而到生后20个月时则1gG增长缓慢，无菌饲养的绝对量较低。gM水平较高，出生12月以后，有的个体超过80ug/mL。无菌饲养的动物lgM量比一般饲养的高。细胞免疫低下者少见，这可能与自发肿瘤少有关。b.形态学特征：在新生鼠中，雌鼠为16.8%，雄鼠3%为小眼或无眼症。0.6%后肢可见多趾症，另外水头症占2%4%，耳头症占0.4%，交合不全占3%。c.生理学特性：有强嗜酒精性。对放射性照射为中等强度感应度，LD50为630+4R，将雄鼠皮肤移植到同系的雌鼠身上，约20日被排斥掉，这是因为在组织相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常显著。d.癌发生率：乳癌发生率低，为01%，白血病为7%-16%化学致癌成功率低，放射性照射较容易诱发肝癌。

2.主动脉瘤对照小鼠：C57小鼠，科学名称：C57，同类系（Consomic Rat）

3.诱导方法：C57小鼠根据体重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重，（360mg/kg体重）（三溴乙醇储存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml储存液+39.5ml生理盐水），俯卧位固定于加热垫上保持体温，背部颈部脱毛膏脱毛，酒精消毒处理，无菌手术剪剪开后背颈部皮肤，用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间，将DOCA 缓释泵塞入皮下，镊子将该处皮肤对齐复合，无菌缝合线缝合皮肤，放置在加热板上保暖，待苏醒后放回鼠盒，手术后用止痛果冻缓解疼痛。

1.发现DOCA+HS处理两周时，年老的C57小鼠即开始形成动脉瘤。

图1.乙酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐在不同时间点对衰老小鼠主动脉瘤的诱导作用。A.老龄小鼠的代表性超声图像和主动脉照片在不同的时间点使用DOCA加盐或单独加盐。B.量化腹主动脉的外径。C.老年小鼠施用DOCA加盐或单独加盐后的存活曲线。D.使用DOCA加盐或仅在不同时间加盐的成年小鼠的主动脉瘤发生率。

2.乙酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐对衰老小鼠在不同时间点的血管病理学的影响。

图2.A.来自DOCA加盐或单独加盐的不同时间点的老年小鼠苏木精和曙红（HE）的主动脉染色的代表性照片。B.Masson染色的代表性照片显示了不同组的胶原蛋白沉积。C.弹性蛋白染色的代表性照片展示了来自不同群体的主动脉的弹性蛋白完整性。D.α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白，血管平滑肌细胞）的免疫组织化学染色显示在DOCA加盐给药后平滑肌细胞变性。

3.醋酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐对衰老小鼠在不同时间点的炎症细胞浸润以及炎症细胞因子、粘附因子和纤维化因子表达的影响。

图3.A-C.免疫荧光检测在不同时间点给予DOCA加盐或盐单独处理的老龄小鼠主动脉组织中CD3阳性T细胞，CD68阳性巨噬细胞和ly6B.2阳性嗜中性粒细胞的浸润。D.主动脉中促炎因子（TNF-α，IL-6，IL-1β，CCL-2）的mRNA表达水平逐渐升高，而抗炎因子（IL-10，IL-13）的mRNA表达水平逐渐降低老年小鼠的组织施用DOCA加盐。

4.在DOCA加盐处理过的小鼠的主动脉中差异表达的基因的RNA序列分析。

图4.在DOCA加盐处理过的小鼠的主动脉中差异表达的基因的RNA序列分析，这些小鼠已形成动脉瘤（n = 3），未发育到动脉瘤（n = 5）。A.给予DOCA加盐或仅加盐的成年小鼠主动脉之间转录差异的热图。 | logFC | ≥2和Padj <0.005被设置为严格截止。B.使用Reactome Pathway数据库，以p <0.05为阈值，对上调和下调的差异表达基因进行GO富集分析。C.热图显示了一些关键的差异表达基因，这些基因富含止血，免疫系统和细胞外基质组织途径。