人结直肠癌细胞HCT116绿色荧光标记肿瘤模型

　　人结直肠癌细胞（HCT116）是1979年M.Brattain等从患结肠癌的男性病人中分离的三株恶性结直肠癌细胞系之一，在裸鼠可形成上皮样的肿瘤，是用于研究癌症生物学特性的常见细胞株。体外研究发现HCT116是一种生长因子独立的细胞系，具有侵入和高运动能力[1]。皮下移植实验表明此细胞株高致瘤性。利用脂质体2000将绿色荧光标记表达载体chicken β-actin-GFP-NEO转染HCT116细胞,通过G418抗生素筛选到一株稳定高表达绿色荧光蛋白(eGFP)的单克隆人结直肠癌细胞（HCT116）细胞，命名为HCT-116-eGFP, 该单克隆细胞在荧光显微镜下呈强荧光，荧光较均匀的分布于整个细胞内,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP , 细胞形态和未转染细胞无明显区别(图1)。

图1 HCT116稳定高表达GFP的单克隆细胞株（200×）和绿色荧光表达载体的构建

　　将对数生长期的HCT-116-eGFP细胞皮下接种于2只BALB/CA-nu，接种细胞数量为1×106/只, 采用活体荧光影像系统摄像动态观察。模型制作采用的BALB／CA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15—18 g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。

　　分别在接种后的7、14、21、28、35d观察裸鼠皮下肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到肿瘤荧光，通过肿瘤组织发出的荧光的光子数确定肿瘤的大小，随着观察天数的增加，肿瘤的体积和发光强度增加，且具有很好的相关性(图2)。以肿瘤细胞发射的光子数对小鼠荷瘤时间作图得到荧光蛋白标记的肿瘤细胞在裸鼠体内的生长曲线（图3）。

图2　皮下接种HCT-116-eGFP肿瘤生长影像分析

图3　荧光标记肿瘤的生长曲线

　　综上，用绿色荧光蛋白标记的人结直肠癌细胞系HCT-116建立的裸鼠肿瘤模型为研究肿瘤和机体相互作用的早期动态变化提供了相对敏感的模型，同时也为抗肿瘤药物的药效评价提供了一种简便、可行的方法。