病毒性肺炎小鼠感染模型

各品系小鼠对PVM的易感性不同，文献报道和我们自己的研究表明，BALB/c小鼠在新生期可出现典型的感染症状，优于其他品系。

实验材料

实验动物为SPF级BALB/c小鼠，感染症状等与性别无明显关系，感染优选３周龄小鼠。

实验使用毒株为ATCC来源PVM毒株（VR-25）。

实验环境

ABSL－２实验室，

使用负压IVC饲养动物

使用AII型生物安全柜更换动物垫料，并进行感染等操作。

实验操作规程：

病毒扩增：在BSL-2实验室进行病毒扩增，并使用TCID50法测定病毒滴度

使用1,000TCID50／只动物进行滴鼻感染

监测动物临床表征变化

监测动物死亡率

动物处理伦理：

动物感染实验，动物的痛苦不可避免，应按照伦理审查确定研究的科学性，并根据研究需要减少动物的使用。

包括：

使用肺组织定量PCR的方法可以进行组织病毒滴度的评价。测定方法参考团体标准《实验动物PVM的核酸检测方法》，或使用文献支持的下列引物：

PVM -F5′-GCCTGCATCAACACAGTGTGT- 3′;

PVM -R 5′-GCCTGATGTGGCAGTGCTT- 3′

测试需和组织内参基因表达做均一化处理，如使用GAPDH做内参。

表达水平的结果如下图所示：

图示：小鼠感染PVM７天后肺组织PVM RNA水平（参比GAPDH做均一化处理）。

C:未感染对照，IN-C：感染对照，IN-A，IN-F：两个处理组。

表达水平还可经免疫组化进行分析，使用PVM大鼠免疫血清进行小鼠肺组织PVM免疫组化染色，和上图对应的示例图如下：

小鼠感染PVM病毒后组织PVM免疫组化。

A:未感染对照，Ｂ：感染对照，Ｃ，Ｄ：两个处理组。

３周龄BALB/c小鼠感染PVM后，可见体重较对照组体重下降，如下图所示：

图示：BALB/c３周龄小鼠感染PVM体重变化

Control：未感染动物；NS：生理盐水处置感染动物；GL：某药物治疗组。

感染动物在感染３日后出现竖毛，弓背等症状。严重者体重下降，出现行动迟缓，耳及尾部可见紫绀，震颤。如下图所示：

动物感染３~７日，肺组织可见充血水肿，组织病理可见肺间隔增宽，肺组织内血管充血，出血，偶见炎细胞浸润。如下图所示。