外源性补充DLHcy诱导伴高同型半胱氨酸血症的小鼠动脉粥样硬化模型

6周龄ApoE-/-雄性小鼠，体质量18-22g。

1 实验材料

1.1 实验动物 选择50只健康雄性ApoE-/-小鼠，体质量18-22 g，均购于北京华阜康华生物科技股份有限公司。饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物中心动物房内，5只/盒屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50% ～ 60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水，IACUC号：ILAS-YZW2019001。

1.2仪器与试剂 采用全自动生化分析仪检测血浆总同型半胱氨酸（Homocystein, Hcy）、三酰甘油( triglyceride, TG) 、总胆固醇( total cholesterol, TC) 、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein, HDL)生化指标。同型半胱氨酸：DL-Hcy(Sigma-Aldrich,H4628)，使用浓度为1.8g/L。

2 方法

2.1 动物模型制备 6周龄 ApoE-/- 小鼠采用普通饲料喂养，饮水中外源性补充DL-Hcy的方式诱导伴高同型半胱氨酸的动脉粥样硬化动物模型。造模用DL-Hcy货号为 (Sigma-Aldrich,H4628)，使用浓度为1.8g/L，每三天更换一次饮水，并记录饮水量，持续造模14周，并在第6 周和12 周分别取血及主动脉窦冰冻切片检测血清Hcy水平及斑块大小以判断模型进展。

2.2 标本采集及处理 完成DL-Hcy持续干预14周后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清，-80℃冰箱冻存。同时取主动脉窦10%中性福尔马林中固定，30%蔗糖脱水，冰冻切片包埋剂包埋并切片；其余血管组织液氮冷冻-80℃保存。