非酒精性脂肪肝病小鼠高脂饮食诱导模型

6周龄C57BL/6J雄性小鼠， 16-18 g。

1 实验材料

1.1 实验动物 选择40 只健康雄性C57BL /6 小鼠，体质量16-18 g，均购于北京唯尚立拓科技有限公司，实验动物许可证号：SCXK(京) 2016-0009，饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物房内，5只/盒，温度( 22±2) ℃，湿度50% ～ 60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水。

1.2仪器与试剂 1）全自动生化分析仪用于检测三酰甘油( triglyceride, TG) 、总胆固醇( total cholesterol, TC) 、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein, HDL) 等生化指标。2）石蜡包埋机( LEICA)。3)高脂饲料主要营养物质含量：60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白质

2 方法

2.1 动物模型制备 采用高脂饮食诱导NAFLD模型，造模用饲料货号为MD12033( 60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白质) ，购自江苏美迪森生物有限公司，持续造模12周，并在第6 周、9周和12 周分别进行糖耐量和胰岛素耐量测定，检测模型小鼠是否发生糖耐量受损，从而判断模型进展。

2.2 标本采集及处理 在实验结束后，称取小鼠体质量，用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧位置于动物实验台上，固定四肢，脱毛后暴漏胸腹部，采用腹主动脉采血方法。室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min，分离血清，测定血脂水平。解剖小鼠腹腔，肉眼观察肝脏大体形态，在肝右叶同一位置切取1 块0.5 cm × 0.5 cm ×0.3 cm肝组织，滤纸吸干后称质量，其中一块进行及时冰冻切片，用于油红O染色。其余肝组织分装于1.5 mL 离心管中，-80℃低温保存。

1 肝脏大体形态变化

2 肝脏脂肪水平指标检测

3肝脏脂滴染色

4 血清脂质水平检测