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C57BL/6小鼠
一、模型设计原理：
GRNA介导Cas9蛋白剪切目标外显子两端的内含子DNA，同时提供同源模板Donor，基因组两端通过同源重组修复方式进行DNA修复，在特定外显子两端插入FloxP。CCKBR-FloxP小鼠与组织特异性表达Cre小鼠交配，从而实现CCKBR基因条件性敲除的目的。实验采用最新的spCas91.1进行注射，减少了基因组中的off-Target。
根据CCKBR基因组结构和蛋白功能保守区分析在Exon1的两边定点插入FloxP位点，实现将Exon1条件性敲除。
二、模型设计过程：
1)CCKBR基因GRNA靶点设计及活性检测
在要删除的Exon1外显子两端，设计gRNA靶点如下：
Cckbr-L1: GCTTAGTTGGAGCTGAGTGGG
Cckbr-L2: TGCTGGAGCTAGCTTAGTTGG
Cckbr-L3: AGCAGGTGGAACCGGTGCTGG
Cckbr-L4: CGCGGGAGCAGGTGGAACCGG
Cckbr-R1: GGACCTAGGTGGGAGCTGAGG
Reverse Complement: CCTCAGCTCCCACCTAGGTCC
Cckbr-R2: GAGGGGAGGGACCTAGGTGGG
Reverse Complement: CCCACCTAGGTCCCTCCCCTC
Cckbr-R3: TTGGAGTCAGGAGAGCTTGGG
Reverse Complement: CCCAAGCTCTCCTGACTCCAA
Cckbr-R4: TGTGAAGGTGTTGGAGTCAGG
Reverse Complement: CCTGACTCCAACACCTTCACA
使用Cas9/gRNA靶点效率检测试剂盒（货号：VK007）进行gRNA体外活性检测，结果如下：
gRNA靶点活性检测结果分析如下：
2）CCKBRflox/flox,villinCre小鼠设计
3）CCKBRflox/flox,villinCre小鼠模型的繁育及鉴定结果：
CCKBRfloxp/flox小鼠与Cre 的小鼠（villinCre）杂交，对后代自交获得的小鼠进行基因型鉴定，成功获得CCKBR肠道上皮细胞条件性基因敲除小鼠CCKBRflox/flox,villinCre）。见下图
经鉴定12#:CCKBRflox/flox,villinCre
CCKBRfl/fl; VillinCre小鼠结果分析
2、肠道CCKBR检测结果：
3.小鼠有创及清醒状态血压结果：
北京中科光析科学技术研究所济南分所承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。
2023-12-21 15:23:14
