慢性束缚致抑郁模型

文献中关于建立该模型所使用的大小鼠品系繁多。慢性束缚应激动物模型都采用常用的模式动物, 如大鼠和小鼠。多选用封闭群 Sprague- Dawley 、 Wistar大鼠 , 也有Lister和Fische大鼠;CD-1 、C3H 、BALAc、 LACA 小鼠。在不同生长阶段的研究中又包括幼鼠 、孕鼠 、成熟鼠和老龄鼠 。 本实验室一般选用8-10周龄左右的Wistar 大鼠、5-10周龄的SD大鼠和4-6周龄的ICR小鼠、10 ～ 12 周龄的C57BL /6J小鼠。雄性多见。

1、实验仪器

束缚采用的实验仪器为大、小鼠行为限制器。由聚酯材料构成，透明可视，方便监视大小鼠的行为状态。顶端和底部有多个直径1cm通气孔，有助于大小鼠的呼吸畅通、排泄物的排出，避免对建模带来干扰。行为限制器的长度可调，可将不同体重动物的束缚强度同一化。

图1 行为限制器实物图

2.实验方法

将行为限制器平放、底部敞开，使动物面朝行为限制器敞口进入内部。用配套的塞托封闭开口并固定塞托。使固定后，动物在行为限制器内的空间长度小于其身长，并保证只有头部可以自由活动而四肢活动受限（图2）。

图2 行为限制器的大鼠束缚

慢性束缚模型是采用行为制动的方式对动物产生单纯性心理应激，是比较常用的用于制备情绪、学习记忆障碍等动物模型的方法。引起抑郁、焦虑和学习记忆障碍的束缚强度不同文献报导有一定的差异。大多报导强度在4 h-8 h/day、连续14-48 d 。

慢性束缚致抑郁模型的建立

一般慢性束缚致大鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活动 14 h( 18: 00 至次日 8: 00) ，限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 28 d，第 29 天开始进行行为学测试。

一般慢性束缚致小鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活动 6 h( 10: 00 至16: 00) ，限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 21 d，第 22天开始进行行为学测试。

3、行为学检测

慢性束缚到规定时间后，依实验需要，采用抑郁行为实验方法进行检测。

4. 注意事项

（1）行为实验检测应在动物自由饮食饮水期间进行。

（2）实验动物大鼠体重应该控制在 280-300 g。小鼠体重应该控制在25-32 g

（3）由于束缚器是树脂材料的圆柱形，顶端有数个通气的小孔，才束缚早期由于动物挣扎剧烈，会出现动物窒息的情况，所以一开始需要我们 24 h 观察，及时排除动物窒息死亡的情形。

（4）行为测试完毕后的动物要返回行为限制器内至实验结束。

5. 模型分析指标

5.1 体重检测

分别于第8、15、22、29、36、43、50 d 称量大鼠的体重。

5.2 糖水偏爱实验

于造模结束后第1 天开始实验( 造模前进行糖水偏爱训练)。糖水偏爱实验分为训练期( 适应期) 及测试期。训练期内，给予动物一瓶蔗糖糖水(2%) 和一瓶纯水，动物自由饮水，让小鼠适应含糖饮水。动物禁食( 不禁水)8 h 后进行动物的糖水/ 纯水消耗实验测试(15h)，根据动物糖水、纯水摄入量计算动物的糖水偏爱指数( 糖水偏爱指数= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。本实验进行2 次糖水偏爱实验。造模前进行糖水偏爱训练及基线测试，根据结果，将动物分组。应激结束后，再进行一次糖水偏爱测试，以评价CUMS 模型快感缺失的症状。

5.3 新奇事物实验

于自主活动实验次日将大鼠放入自主活动测试箱中测试。测试前在测试箱中央放入一个蓝色的圆柱体新奇事物。实验时将大鼠面向测试箱壁放入，并记录10 min 内首次探索新奇事物的时间( 即潜伏期，10 min 内无探索行为，则潜伏期时间记为10 min) 、探索次数以及探索时间。

与对照组比较，从第15 天开始，14h /28 d CＲS 组雌性和雄性大鼠的体重均显著下降( P ＜ 0. 01) 。而10 h /28 d CＲS 组雌雄性大鼠与对照组相比，体重无显著性差异。

抑郁行为判断标准：蔗糖偏嗜度低于0.4或者与对照组相比有显著性减低（P <0.05）。如表2 所示，第1 天糖水基线测试表明CＲS 组雌雄性大鼠各组间的糖水偏爱指数无差异。与糖水基线比较，14 h /28 d CＲS 雄性组糖水偏爱指数水平明显下降( P ＜ 0. 01) ，而对照组无明显差异。与对照组相比，14 h /28 d CＲS 雄性组的糖水偏爱指数及差值极显著低于对照组( P ＜ 0. 01) 。与糖水基线比较，14 h /28 d CＲS 雌性组糖水偏爱指数水平明显下降( P ＜ 0. 05) ，而对照组无明显差异。与对照组相比，14 h /28 d CＲS 组的糖水偏爱指数差值极显著低于对照组( P ＜ 0. 01) 。10 h /28 d CＲS 组雌雄大鼠与自身糖水基线及对照组相比，均没有显著性差异。

3. 慢性束缚应激对大鼠新奇事物探索行为的影响

如表3所示，14 h /28 d CＲS 组的雌雄性大鼠与对照组相比，潜伏期显著升高( P ＜ 0. 01) ，探索次数、探索时间明显下降( P ＜ 0. 01) 。14 h /28 d CＲS雌性组的探索时间明显比对应雄性组长( P ＜0. 05) ，而14 h /28 d C 雌性对照组的探索时间明显比对应的雄性组短( P ＜ 0. 05) 。10 h /28 d CＲS 雄性组大鼠的潜伏期显著增长( P ＜ 0. 05) ，探索时间明显减短( P ＜ 0. 05) 。10 h /28 d CＲS 雌性组大鼠仅潜伏期显著增长( P ＜ 0. 05) ，探索次数及探索时间和对照组相比则无明显变化。