人胰腺癌细胞PANC1绿色荧光标记肿瘤模型(PANC1eGFP)

人胰腺癌细胞PANC-1来自ATCC，呈多角形、上皮样贴壁生长。该细胞株源自于胰腺癌导管细胞，其倍增时间为52小时。染色体研究表明，该细胞染色体众数为63，包括3个独特标记的染色体和1个小环状染色体。该细胞的生长可被1 unit/ml的左旋天冬酰胺酶抑制；能在软琼脂上生长；能在裸鼠上成瘤。

裸鼠无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠），先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群（Linkage group）内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nn/+）各方面表现都正常。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-GFP-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chicken beta-actin）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。

2. PANC-1-eGFP荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染PANC-1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB／CA- nu裸鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

本模型将GFP基因转染到PANC-1中得到了高表达GFP细胞株。将PANC-1-GFP细胞经皮下接种至BALB／CA-nu裸鼠，用活体荧光成像系统连续观察。在皮下接种PANC-1-eGFP肿瘤细胞后第7天，用生物发光成像系统可以观察到肿瘤发光。随着观察天数的增加，荧光强度增强（图1）。

模型优点：1）无创伤性；2）可多次重复在不同时间点检测；3）快速扫描成像(时间<5 min)；4）动物整体成像；5）同一实验动物体内获得全部时间点的整体数据。

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图1 皮下接种PANC-1-eGFP肿瘤生长影像分析

应用此癌症模型利用无创伤活体荧光成像对癌细胞生长的检测，可对癌症治疗之前和过程中的癌细胞的变化进行实时观测和评估，可应用于癌症体内用药的疗法中。