人神经母细胞瘤SHSY5Y荧光素酶标记肿瘤模型

SHSY5Y 细胞来自ATCC，衍生于人的神经母细胞瘤细胞系SK2N 2SH，表达儿茶酚胺能神经元特有的酪氨酸羟化酶、多巴胺2B2羟化酶和多巴胺转运体, 该细胞系被广泛运用于PD 发病机制的研究。

裸鼠(Nude Mouse）, 先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群（Linkage group）内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nu-/+）各方面表现都正常。

1.表达载体构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达（图1）。

图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建

2. SHSY5Y-luc荧光细胞的获得：采用脂质体2000转染SHSY5Y细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB/CA- nu裸鼠进行脑部接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

本模型将luc基因转染到SHSY5Y中得到了高表达luc细胞株。收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106/mL。BALB/CA- nu裸鼠脑部接种，1×106个细胞/只。先麻醉小鼠，脑立体定位仪固定小鼠头部，脑区定位，注射神经母细胞瘤细胞。接种后第7、14、21和28天，活体荧光成像系统观察，发现SHSY5Y-luc细胞在裸鼠脑部7天即能够成瘤，且随时间增长而肿瘤体积变大、荧光强度增加（图2）。

图2 人神经母细胞瘤SHSY5Y-luc脑原位接种