心脏特异D173L转基因小鼠扩张型心肌病模型

D5F173L转基因多巴胺小鼠模型。

背景品系为C57BL/6小鼠，属于动物界、脊索动物门、脊椎动物亚门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、家鼠属、家鼠种的动物，1921年立特(Little)用艾比·拉特洛坡(Abby Lathrop)的小鼠株，雌鼠57号与雄鼠52号交配而得C57BL，1937年从C57BL分离出C57BL/6亚系培育而成。

由美国乔治敦大学Pedro A. Jose博士惠赠的pcDNA-h-D5F173L表达载体人D5F173L质粒，转化入大肠杆菌JM109，摇菌扩增后测序，测序结果经Blast分析，显示得到的pcDNA-D5-F173L与Genebank 中序列对比得到目的突变位点正确。用显微注射法将连接MHC启动子的转基因载体注射到C57BL小鼠的受精卵中，用C57BL小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。

1.多巴胺D5受体D5F173L转基因小鼠心脏超声结果

心脏超声，主动脉瓣血流多普勒频谱图像:显示小鼠左心室结构，获得左心室运动曲线，主动脉瓣血流频谱图像。

1.1 左心室内体积分析显示：D5F173L转基因小鼠舒张末期和收缩末期左室内体积均明显低于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01vsD5WT，阴性对照，n=6，ttest)，提示多巴胺D5突变基因173L(D5F173L)转基因小鼠血压升高后可引起心脏继发性左心室室腔增大。

图1.四月龄至六月龄多巴胺D5突变基因F173L(D5F173L)，S390G(D5S390G)及正常人D5基因(hD5WT)（对照）转基因小鼠舒张末期和收缩末期左室内体积比较：

A:四月龄舒张末期和收缩末期左室内体积比较。

B:五月龄舒张末期和收缩末期左室内体积比较。

C:六月龄舒张末期和收缩末期左室内体积比较。

1.2 舒张末期左室内径，左室前后壁及左室收缩功能相关性分析显示：

a）左室内径变化：四到六月龄D5F173L转基因小鼠舒张末期左室内径均明显低于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01 vs. hD5WT，阴性对照，n=6，t test)；

b)左室前壁变化：D5F173L转基因小鼠舒张末期左室前壁与hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠相比四月龄无显著性变化，五月龄及六月龄明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.05vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；

c)左室后壁变化：四到六月龄D5F173L转基因小鼠舒张末期左室后壁均明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01 vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；

d）舒张末期左室内体积：D5F173L转基因小鼠随月龄的增加均呈显著性减小的趋势且具有统计学意义（P<0.05，n=6，t test）。

1.3 收缩末期左室内径，左室前后壁及左室收缩功能相关性分析显示：

a)内径变化：四到六月龄D5F173L转基因小鼠收缩末期左室内径均明显低于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01 vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；

b)前壁变化：D5F173L转基因小鼠收缩末期左室前壁与hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠相比四月龄无显著性变化(* P>0.05vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；五月龄及六月龄D5F173L转基因小鼠收缩末期左室前壁均明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；

c)后壁变化：四到六月龄D5F173L转基因小鼠收缩末期左室后壁均明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠 (* P<0.01 vs. hD5WT，阴性对照，n=6，ttest)；

d)收缩末期左心室内体积： D5F173L转基因小鼠随月龄的增加显著减小（P<0.05，n=6，t test）。

1.4 左心室缩短分数：D5F173L转基因小鼠左心室缩短分数四至六月龄均明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠，且随月龄增加差异显著性增加(* P<0.01vs. D5WT，阴性对照，n=6，t test)。

1.5 左心室重量：D5F173L转基因小鼠左室重量四至六月龄均明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠，且随月龄增加差异显著性增加(* P<0.05 vs. D5WT，阴性对照，n=6，t test)，

2.心脏组织病理切片HE染色及马松染色结果：

多巴胺D5突变基因F173L(D5F173L)转基因小鼠心腔和心室较正常人D5基因(hD5WT)（对照）转基因小鼠显著增大，心肌细胞间隙增大，心肌纤维化加重。

图2.多巴胺D5突变基因DF173L及正常人D5基因(hD5WT)心脏特异转基因小鼠心组织HE染色及马松染色结果