D173L转基因小鼠模型

D5F173L转基因多巴胺小鼠模型。

背景品系为C57BL/6小鼠，属于动物界、脊索动物门、脊椎动物亚门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、家鼠属、家鼠种的动物，1921年立特(Little)用艾比·拉特洛坡(Abby Lathrop)的小鼠株，雌鼠57号与雄鼠52号交配而得C57BL，1937年从C57BL分离出C57BL/6亚系培育而成。

由美国乔治敦大学Pedro A. Jose博士惠赠的pcDNA-h-D5F173L表达载体人D5F173L质粒，转化入大肠杆菌JM109，摇菌扩增后测序，测序结果经Blast分析，显示得到的pcDNA-D5-F173L与Genebank 中序列对比得到目的突变位点正确。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL小鼠的受精卵中，用C57BL小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因小鼠肾组织中D5R的表达（图2）。

1 2 3 4 M

图2Western Blotting 鉴定D5 F173L转基因小鼠D5受体蛋白在肾脏的表达

1:野生型对照小鼠，2:32号首建鼠的F1代小鼠，3:4号首建鼠的F1代小鼠，

4:16号首建鼠的F1代小鼠

1.多巴胺D5受体D5F173L转基因小鼠血压值

分别测量D5F173L、D5S390G和hD5WT小鼠以及阴性对照小鼠血压值，组间比较结果显示：D5F173L转基因小鼠三至六月龄收缩压、舒张压和平均动脉压都明显高于hD5WT转基因小鼠及非转基因小鼠(* P<0.05 vs. D5WT, 阴性对照, n=6，ttest) 。

图1.D5F173L、D5S390G和D5WT转基因及非转基因对照四个实验组小鼠三月龄至六月龄收缩压、舒张压及平均动脉压比较.

2.肾组织病理切片HE染色及免疫组化结果显示

多巴胺D5突变基因F173L(D5F173L)转基因小鼠肾小球球囊间隙较正常人D5基因(hD5WT)（对照）转基因小鼠稍微变窄，肾小管上皮细胞内Na-K-ATP酶表达有所增加。

图2.多巴胺D5突变基因DF173L及正常人D5基因(hD5WT)转基因小鼠肾组织HE染色及Na-K-ATP酶免疫组化结果

A:正常人hD5WT基因转基因小鼠肾组织HE染色。

B:多巴胺D5突变基因DF173L转基因小鼠肾组织HE染色

C: 免疫组织化学检测Na-K-ATP酶在转正常人hD5WT基因小鼠肾组织中的表达

D: 免疫组织化学检测Na-K-ATP酶在转突变基因多巴胺D5F173L小鼠肾组织中的表达