动物模型

小鼠模型

人肝癌BEL7402荧光素酶标记细胞BALB／c裸小鼠肿瘤模型全身性表达胰岛素样生长因子IGF1转基因小鼠条件性Pfkfb3过表达小鼠模型人结直肠癌（CRC）异种移植小鼠模型 abca1条件性敲除小鼠调节肠道干细胞分化基因小鼠谱系示踪模型小鼠乳腺癌细胞4T1绿色荧光记肿瘤模型 EXO1基因剔除小鼠 Mapk8敲除小鼠糖耐量异常KKAy小鼠模型
鹌鹑模型

高脂高嘌呤饮食联合氧嗪酸钾诱导鹌鹑糖脂代谢紊乱模型建立高尿酸血症鹌鹑肠道菌群结构分析高蛋白高钙饮食合并限制饮水建立鹌鹑痛风模型鹌鹑动脉粥样硬化模型鹌鹑高尿酸血脂代谢症动物模型建立
大鼠模型

APPswe/PS1dE9/TAU转基因AD大鼠红色荧光工具大鼠 NESTIN基因敲除大鼠脑组织特异性表达NEUNcre工具大鼠绿色荧光工具大鼠人NPR1转基因大鼠肝脏特异表达NTCP转基因大鼠 C9ORF72基因HRE敲入大鼠维甲酸诱导第一、二鳃弓综合征大鼠模型 GDI基因敲除大鼠
疾病模型

A/California/07/2009(H1N1)滴鼻途径感染布氏田鼠模型慢性温和不可预测性应激（CUMS）DOCA诱导主动脉瘤模型 A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染北京鸭模型绿色荧光标记人胰腺癌细胞SW1990皮下接种裸鼠肿瘤模型轻症EV71动物模型人胃腺癌MGC803绿色荧光标记肿瘤模型肠道病毒71人清道夫受体B2（hSCARB2）转基因动物模型 2009年甲型H1N1流感布氏田鼠模型人胰腺癌细胞PANC1绿色荧光标记肿瘤模型(PANC1eGFP)
犬鼠模型

犬动物模型：锥形非血管化膀胱移植输尿管重建犬扩张型心肌病变模型建立右心室起搏致心力衰竭犬模型 ApoE基因突变犬动脉粥样硬化及临床并发症模型 A/California/07/2009（H1N1）滴鼻感染比格犬模型富血小板血浆协同改善Beagle犬手术诱导的骨关节炎模型建立犬自体同源颅骨成形术模型的建立静脉注射大肠杆菌制备高动力型感染性休克犬模型
羊类模型

鄂尔多斯细毛羊动物模型构建鲁中山地绵羊动物模型构建西藏羊动物模型构建陕北细毛羊动物模型构建兰州大尾羊模型构建小尾寒羊动物模型构建湖羊模型建立蒙古羊动物模型构建
猪类模型

A/California/07/2009(H1N1)经气管途径感染猪模型双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪动物模型 A/Vietnam/1194/2004（H5N1）经气管途径感染猪模型 H5N1气管镜感染猪模型甲型H1N1流感病毒气管插管感染猪模型免疫抑制剂诱导小耳畸形猪模型
鱼类模型

急性白血病斑马鱼模型耳功能损伤斑马鱼模型非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）斑马鱼模型帕金森疾病（PD）斑马鱼模型丙型肝炎病毒亚复制子斑马鱼模型 ddx18基因敲除导致的斑马鱼白血病模型心肌损伤斑马鱼模型
猴类模型

SHIVKB9静脉途径感染恒河猴模型 SHIV1157ipd3N4直肠途径感染恒河猴模型 SIVmac251直肠途径感染恒河猴模型帕金森疾病恒河猴基因修饰模型气管镜感染MERSCoV绒猴模型 SHIV1157ipd3N4静脉途径感染恒河猴模型肌苷致猕猴急性高尿酸血症气管镜感染MERSCoV恒河猴模型结核猴模型（含耐药结核猴模型）RTSHIV/TC静脉途径感染恒河猴模型
兔类模型

实验性牙槽突裂兔模型 SARSCoV滴鼻途径感染新西兰兔模型过敏性紫癜兔模型鼠疫菌的豚鼠和新西兰兔模型建立兔模型：术后镇痛效果临床评价心搏骤停兔模型构建心肌铁过载兔模型的制作新西兰兔骨缺损动物模型

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IFITM6敲除小鼠_

2023-12-21 15:23:03

原创版权

摘要：固有免疫是机体防御外来病毒感染的第一道防线，通过识别病原并产生各种细胞因子、趋化因子、干扰素（IFN）等多种抗病毒因子。干扰素诱导的跨膜蛋白（IFITM家族），是一类具有抗病毒作用的ISG（干扰素诱导基因）的编码产物，并证明其在多种生物过程中发挥作用，具有广泛的抗病毒作用，并在免疫信号转导、细胞归巢等发挥作用。

IFITM家族包括IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5、IFITM6、IFITM7和IFITM10，除了IFITM5特异性表达与骨细胞，不依赖与IFN的表达，其余家族
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CSTR:16397.09.0I01000712

资源中文名称

IFITM6敲除小鼠_

资源英文名称

IFITM6 gene knockout mice

疾病概述

固有免疫是机体防御外来病毒感染的第一道防线，通过识别病原并产生各种细胞因子、趋化因子、干扰素（IFN）等多种抗病毒因子。干扰素诱导的跨膜蛋白（IFITM家族），是一类具有抗病毒作用的ISG（干扰素诱导基因）的编码产物，并证明其在多种生物过程中发挥作用，具有广泛的抗病毒作用，并在免疫信号转导、细胞归巢等发挥作用。 IFITM家族包括IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5、IFITM6、IFITM7和IFITM10，除了IFITM5特异性表达与骨细胞，不依赖与IFN的表达，其余家族在IFN的调控下在多组织和器官广泛表达。其中，FITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM10在人类中表达，FITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM6在小鼠中表达（图1）。

实验动物背景信息

实验所用小鼠（C57BL/6）背景。C57BL/6小鼠也被称为C57 black 6，也称作B6。1921年被培育出来，属于近交品系。该品系的最主要的两个特点就是品系稳定和易于繁殖。主要用途包括：作为生理学与病理学的实验动物模型、构建转基因动物模型、作为产生自发突变和诱发突变的同基因型小鼠的背景品系。该品系在国内使用频率高，价格相对便宜。

模型制作方法

3.1 实验材料

3.1.1 实验动物

C57BL/6购自北京维通利华实验动物技术有限公司SCXK(京）2016-0006。超排用雌鼠数量10-15只，年龄3周龄，交配传代用野生型鼠为成年8-10周龄小鼠。实验中基因工程小鼠由本实验室繁殖产生。实验中涉及动物的操作程序已获得中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准，批准号为ZLF18004.

3.1.2实验仪器

仪器及耗材	生产厂商
NanoZoomer S60数字病理切片扫描仪	日本滨松光子学株式会社
激光共聚焦扫描显微镜	Leica
流式细胞仪	BD
透射电子显微镜	JEOL
显微注射仪	Nikon
光学显微镜	Nikon
化学发光凝胶成像系统	BIO-RAD
PCR仪	BIO-RAD
Realtime PCR仪	ABI
冰冻切片机	Leica
电泳仪	BIO-RAD
电泳槽	Tanon
数码凝胶图像处理系统	Tanon
组织匀浆机	POLYTRON
恒温培养箱温控振荡箱	Incucell TAITEC
离心机	Eppendorf
摇床	SCILOGEX
塑料薄膜封口机	德清拜杰有限公司
电动鼓风干燥箱	天津市泰斯特仪器有限公司
电子称量器（量程0.5g-620g）	奥豪斯仪器（常州）有限公司
电子称量器（量程0.1mg-220g）	Sartorius
4℃冰箱	海尔集团
-80℃冰箱	SANYO
-20℃冰箱	SANYO
涡旋振荡器	上海沪西分析仪器厂
移液器	Eppendorf

3.1.3实验试剂

试剂	生产厂商
体外转录用试剂盒	Ambion
Taq DNA聚合酶	TaKaRa
T7 转录试剂盒	Invitrogen
T4 DNA裂连接	TaKaRa
胶回收试剂盒	Qiagen
质粒提取试剂盒	Axygen
Trizol试剂	Invitrogen
逆转录试剂盒 DNA提取试剂盒	Invitrogen 北京全式金生物科技有限公司
GADPH	Santa Cruz Biotechnology
NC膜	Millipore
化学发光液	ImmunoCruz
蛋白质分子量标记物	Takara
蛋白酶抑制剂	罗氏
组织裂解液	Thermo
丽春红	Beyotime
BCA试剂盒	Beyotime
Westernblot洗液（10×）	Beyotime
30%Acr-Bis	Beyotime
SDS-PAGE电泳液	Beyotime
Western blot转膜液（粉剂）	Beyotime
TEMED	Beyotime
过硫酸铵	Beyotime
1.5 M Tris·HCl（pH=8.8）缓冲液	Beyotime
1 M Tris·HCl（pH=6.8）缓冲液	Beyotime
琼脂	BD公司
异丙醇	北京化工厂
脱脂奶粉	内蒙古伊利实业集团股份有限公司
Anti-Flag	sc-166384

3.1.4模型构建流程

利用CRISPR/Cas9技术制备IFITM6敲除小鼠。选择敲除第二外显子，来构建IFITM6敲除小鼠(B6.IFITM6(tm)-GC/ILAS)。该基因敲除的杂合子小鼠，相互杂交可以获得该基因敲除的纯合子小鼠，使用PCR方法进行基因型鉴定。

3.1.5 IFITM6敲除小鼠的建立

3.1.5.1 IFITM6敲除小鼠模型的建立

（1）设计方案

图 1.IFITM6敲除小鼠模型构建设计方案

（2）构建sgRNA 载体pUC57-sgRNA expression vector，根据基因信息选择靶点并合成sgRNA。

靶点1:

M- Ifitm6-EA1-g-up: TAGGACTGGGATCTGGTATAGG

M- Ifitm6–EA1-g-down: AAACCCTATACCAGATCCCAGT

靶点2:

M- Ifitm6-EB1-g-up: TAGGGAGAATGCCCAGGGATTC

M- Ifitm6–EB1-g-down: AAACGAATCCCTGGGCATTCTC合成的sgRNA单链通过退火复性结合成小片段，插入BSA I线性化的载体，构建完成的sgRNA载体通过体外转录成为可注射的sgRNA。

（3）构建Cas9载体pST1374-NLS-flag-linker-Cas9，载体通过体外转录成为可注射的Cas9-RNA。

（4）显微注射

1）超数排卵：10-15只3周龄雌鼠注射激素进行超排。

2）受精卵注射：取约120枚受精卵进行注射。

3）受体鼠制备：8-10周龄雌鼠与结扎的SD雄鼠交配后选取见栓的雌鼠。

4）胚胎移植：将注射后的受精卵移植到受体鼠输卵管壶腹部（移植一次，120枚卵，5只受体鼠）。

（5）基因型鉴定

1）剪尾编号：出生7-10天的乳鼠，剪取脚趾和尾尖进行编号及取材。

2）基因组DNA提取：使用基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA

3）PCR检测：根据序列信息设计检测引物并进行PCR检测。

（6）结果分析：选取通过PCR检测后含有不同于野生型分子量条带的鼠号，将PCR产物进行TA克隆，之后用检测引物进行菌液PCR，筛选有插入的克隆测序。

（7）根据测序结果确定IFITM6敲除小鼠模型(B6.IFITM6(tm)-GC/ILAS)用于后续实验。

3.1.5.2 动物繁殖和表达图谱分析

获得F0代后，首先通过与野生型鼠进行杂交，进行基因修饰鼠传代能力分析。获得能够传代的杂合子小鼠进行相互杂交，产生纯合敲除小鼠并用于后续实验。

图2. IFITM6敲除小鼠的繁育

3.1.5.3 鼠尾基因组DNA提取

在幼崽出生后剪脚趾标记，收集幼崽脚趾至1.5 mL EP管。然后参照DNA提取试剂盒（全式金）说明书按以下程序操作。

（1）加入100 μL LB2和20 μL Proteinase K，55℃摇床孵育至完全裂解。

（2）12000 rpm 离心5 min，转移上清于一无菌的离心管中。

（3）加入500 μLBB2，立即涡旋5 s，室温孵育10 min。

（4）将全部的溶液加入离心柱中，8000 rpm离心1 min，弃掉流出液。

（5）加入500 μL CB2溶液，12000 rpm离心1 min，弃掉流出液。

（6）重复步骤（5）一次。

（7）加入500 μL WB2（使用前加入88 mL无水乙醇），12000 rpm 离心1 min，弃掉流出液。

（8）重复步骤（7）一次。

（9）10000 rpm 离心2 min，彻底去除残留的WB2。

（10）将离心柱置于一干净的离心管中，开盖静置5 min，在柱的中央加入50~200 μL预热EB（60℃~70℃），盖上盖子，室温静置3 min，12000 rpm 离心2 min，洗脱DNA。保存至4℃冰箱。

我们的承诺

　　北京中科光析科学技术研究所济南分所承诺：我们将根据不同产品类型的特点，并结合不同行业和国家的法规标准，选择适当的检测项目和方法进行分析测试，或根据您的要求进行试验分析。为了不断改进我们的工作，我们致力于提高产品质控分析、使用性能检测能力，并持续加强我们团队的科研技术。同时，我们将积极跟进新的技术和标准，以最大程度地满足您的需求和市场要求。

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