东莨菪碱模型

健康雄性C57BL/6J小鼠，SPF级，8周龄，购自中国医学科学院实验动物中心。常规饲养。

1.药品的制备

实验前，以0.9%的生理盐水溶解东莨菪碱，配制0.1mg/mL（或其他所需浓度）的溶液。溶液配制需在避光条件下完成，且溶液需置于棕色瓶中暂时储存。

适应性饲养3天后，根据随机表将小鼠随机分为5个组：正常组、SCOP各剂量组（0.25、0.5、1、2 mg/kg/d），于每次行为学检测前半小时腹腔注射不同剂量SCOP进行造模，给药体积为0.2ml/10g。

3.模型分析指标

（1）自主活动测试 小鼠自主活动实时检测分析处理系统进行自主活动实验，检测时，将小鼠沿壁放入将小鼠置于测试箱适应2~ 3min后，设定参数后开始实验。软件自动采集分析动物10 min内运动轨迹，通过总路程、平均速度、运动总时间、静息总时间反映动物自主活动情况。

（2）水迷宫实验（Morris water maze）

2.1 水迷宫空间记忆

迷宫分为 4 个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径， 空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余 3 个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练 3 次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从 3 个象限入水)，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应 10 s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为 60s 后，将动物放入水中，若动物在 60 s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息 10 s。若动物在 60 s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为 60 s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留 10 s。每只动物训练的时间间隔为 40 min。每天每只动物 3 次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过 5d 的训练学习后，第 6 天撤去平台， 进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在 60s 内在原平台象限的游程比、时间比，以及穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。

结果如图1所示，腹腔注射系列浓度SCOP后，SCOP各剂量组总路程均较正常组明显升高，呈剂量依赖关系，随着检测时间延长，总路程逐渐减少。各组在腹腔注射SCOP 35min后自主活动度基本趋于稳定。

图1东莨菪碱对C57BL/6J 小鼠自主活动的影响

(n=8，means ± SEM). * P<0.05, ** P<0.01 和对照组相比

如图2所示，各剂量SCOP均能明显损害小鼠空间参考记忆能力，呈剂量依赖性，表现为定航实验中，潜伏期和总游程显著延长、游出率明显减少，小鼠游泳的平均速度也受到明显影响。其中SCOP 1 和2 mg/kg对空间记忆能力损害最为明显，SCOP模型小鼠的搜索策略为典型的边缘型搜索，训练4天时间几乎没有小鼠寻找到平台。

而由于水迷宫直径为130cm，对于小鼠来说，难度太大，在空间探索实验中，正常组小鼠成绩并不理想，SCOP模型组与正常组比较，穿台次数、原实台象限游程比和时间比均无显著性差异（图3）。

图2东莨菪碱在水迷宫实验中对空间参考记忆的获得的影响

(A)逃避率(%). (B) 总路程(cm). (C) 逃避潜伏期(sec). (D) 平均速度(cm/s). * P<0.05, ** P<0.01 和对照组相比.

图3 东莨菪碱在水迷宫实验中对记忆保留的影响

（n=8，mean±S.E.M）(A) 穿台次数 (B) 目标象限停留时间(%)