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雪貂呼吸道解剖结构上下呼吸道分腔明显,受体分布与人极为接近,是迄今为止最为敏感的流感病毒感染动物模型。它对人流感病毒高度易感,病毒不经适应即能使雪貂致病,并易传播给雪貂和人。在自然条件下,雪貂一般也是通过呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒,其感染后的发病过程和机体反应也与人体相似。雪貂除对人流感病毒高度易感外,对禽流感、猪流感病毒也十分敏感,且感染后出现典型症状。
病毒株为A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011和A/Vietnam/1194/2004禽流感病毒,经血凝抑制(HI)实验,筛选出6月龄以下对当下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亚型流感病毒相应血清抗体均为阴性的去势雪貂。为了使动物适应并降低应激反应,所有雪貂均在感染前一周进行体温芯片的皮下植入和实验室适应(使用扫描仪监测体温,BMDS, USA)。感染组通过肌肉注射盐酸塞拉嗪对雪貂进行麻醉,轻度麻醉后感染组每只雪貂经鼻接种病毒。传播实验是在笼子中进行的,该笼子旨在防止动物之间的直接接触,但允许已接种的雪貂与相邻的幼稚雪貂之间保持气流。两组三只雪貂经鼻内接种104TCID50病毒400uL;一组接种了A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒,另一组接种了A/Vietnam/1194/2004病毒。在感染后第24小时,将每只接种过的动物和幼稚的雪貂分别饲养在传播笼中,以测试病毒的传播能力。观察所有动物的临床体征,每天称重作为疾病的指标。分别在感染后第1、3、5、7和9天或暴露后从已接种和未接种过的动物收集鼻拭子和咽拭子,并转移至1 ml PBS中。通过在MDCK细胞中的终点滴定确定病毒滴度。
两组三只雪貂经鼻内接种104TCID50病毒:一组接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒,另一组接种A/Vietnam /1194/2004病毒。观察动物的临床体征,并每天称重以。两种病毒均使雪貂出现打喷嚏、耸毛、嗜睡和食欲下降。一只接种了A/Vietnam/1194/2004病毒的雪貂在接种病毒4天后死亡; A/wild bird/Hong Kong/ 07035-1/2011病毒感染的雪貂无死亡情况。攻毒后9天内,接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒的动物体重下降峰值为10.3%,而接种A/Vietnam/1194/2004病毒的动物体重下降峰值为27.8%(表1,图1)。
表1A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011感染雪貂的临床症状和排毒情况
图1感染雪貂体重
2.雪貂排毒情况
对于这两种病毒,从上呼吸道排出的病毒始于感染后第1天,一直持续到感染后第7天。使用鼻拭子检测到的上呼吸道排毒水平,接种A/Vietnam/1194/2004病毒的动物拭子中病毒滴度明显高于接种A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011的动物毒(P<0.01)(图2)。
两种病毒都没有通过呼吸道飞沫从接种的雪貂传播到幼稚的雪貂。机载接触组的雪貂的鼻拭子或咽拭子中均未检测到病毒(图2))
图2雪貂感染H5N1禽流感后鼻/咽拭子中病毒滴度
3.传播组雪貂血清中H5N1抗体水平
根据HI分析,接触雪貂的恢复期血清(暴露后21天)对病毒特异性抗体阴性(表2)。
表2传播组雪貂血清中H5N1抗体水平
血凝抑制(HI)抗体
3d
5d
7d
14d
21d
A/Vietnam/1194/2004
-
A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011
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