病毒性肝损伤小鼠感染模型

各品系小鼠对MHV的易感性不同，动物感染MHV后可发生隐性感染，也可表现出疾病症状。文献报道和我们自己的研究表明，BALB/c小鼠在新生期和成年期均可出现典型的感染症状。

实验材料

实验动物为SPF级BALB/c小鼠，感染症状等与性别无明显关系，感染优选3周龄小鼠。

实验使用毒株为ATCC来源MHV毒株（A59）。

实验环境

ABSL-2实验室，

使用负压IVC饲养动物

使用AII型生物安全柜更换动物垫料，并进行感染等操作。

实验操作规程：

病毒扩增：在BSL-2实验室进行病毒扩增，并使用TCID50法测定病毒滴度

使用1,000TCID50／只动物进行灌胃感染

监测动物临床表征变化

监测动物死亡率

动物处理伦理：

动物感染实验，动物的痛苦不可避免，应按照伦理审查确定研究的科学性，并根据研究需要减少动物的使用。

包括：

使用肝组织实时荧光RT-PCR方法可以进行组织病毒滴度的评价。下列引物及探针：

MHV –F: 5′-GGAACTTCTCGTTGGGCATTATACT- 3′;

MHV –R:5′-ACCACAAGATTATCATTTTCACAACATA- 3′;

Probe: FAM -ACATGCTACGGCTCGTGTAACCGAACTGT-BHQ-1

测试需和组织内参基因表达做均一化处理，如使用GAPDH做内参。

3周龄BALB/C小鼠感染MHV后，可见较对照组的体重下降，如下图所示：

图示：不同性别的BALB/c、NOD-SCID、BALB/c-nu三品系小鼠感染MHV后体重变化

急性感染小鼠表现精神抑郁、被毛粗乱、营养不良，脱水和体重减轻等症状。部分动物震颤，濒死。如下图所示：

大体解剖：肝脏病变为主，肝表面呈红色或灰白色的多发性针尖大小凹陷病变，脾脏肿大。肝脏灶状病变可融合，表面呈现颗粒状。不同程度的胃肠空虚及小肠胀气。如下图所示：

组织病理学观察：感染初期的肝组织血管内皮细胞和枯否氏细胞核浓缩、核碎裂，细胞质可见碎片化，或玻璃滴样的嗜酸性物质，肝细胞可见轻度空泡化。随着病程发展，出现嗜酸性灶状坏死灶。随后淤血，淋巴细胞、组织细胞显著增生。坏死灶内或肝血窦中有PAS染色阳性的嗜酸性球状体，即所谓的councilman小体。病程末期扩大或融合的巨大的坏死病灶中残存实质细胞。如下图所示。

肝细胞肿胀，胞浆空泡化。

肝小叶内多灶性炎性细胞浸润，伴凝固性坏死。