建立一种长期、稳定、直观且不影响组织细胞形成能力的标记方法是进行干细胞分化与定位研究的有效工具。常用的干细胞标记方法有LacZ基因、荧光染料Hochest和5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)等,这些免疫组化染色的缺陷是只能在组织切片上观察干细胞的存活、迁移和分化情况,需要牺牲大量的实验动物来观察不同时间点干细胞在体内的转归,无法实时、纵向监测干细胞在体内的动态迁移过程(Cao et al., 2004)。荧光发光是通过激发光激发荧光基团达到高能量状态,而后产生发射光。常用的有红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)。荧光成像被广泛用于细胞凋亡、蛋白质相互作用、免疫细胞迁移、癌症及药物研究等多个领域。最近几年,这项技术开始被用于干细胞研究,可在活体内观察干细胞的行为和生物学特性及其转归,准确获得活体动物体内靶位置的干细胞在各时间点的生长和分化情况,加速了干细胞在肿瘤、组织工程等领域的研究进展。
Fig.1 The comparative studies of fluorescent proteinexpressions in different transgenic mice in vivo fluorescence imaging system (A-E represent C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1、CAG-DsRed-2、CAG-EGFP-1、CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-3)ZLFILAS respectively)
Fig.2Theratios of fluorescent cells in LSK cells of in different transgenic mice (A-E represent C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1、CAG-DsRed-2、CAG-EGFP-1、CAG-EGFP-2和CAG-EGFP-3)ZLFILAS respectively)
Fig. 3Theratios of fluorescent cells in bone marrow cells of in different transgenic mice (×200)(A and B represent C57BL/6J-TgN(CAG-DsRed-1 and CAG-EGFP-1).Arrowindicated cells with the morphologyof stem cell.