原代细胞培养

方法：1) 10%水合氯醛2ml腹腔注射麻醉小鼠，浸泡在75%乙醇中。2) 在无菌条件下打开胸、腹腔，暴露心脏，依次剪去胸腹腔器官直至暴露主动脉，完整分离主动脉，放入35mm无菌平皿中，加入1 m

淋巴细胞主要来源：脾脏、外周血等外周血单个核细胞：淋巴细胞+单核细胞分离方法：密度梯度离心法，因为血液中各成分的比重存在差异，因此得以分离。第一层为血浆层；第二层为环状乳白

小鼠脑微血管内皮细胞分离培养1.C57小鼠颈椎脱臼处死后浸泡于75%乙醇中消毒3~5 min后断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑置于盛有冷D-Hanks'液的玻璃培养皿中解剖

（1）取成牛眼球，75%酒精消毒，取出周围多余组织，用PBS洗3次，用PBS流水冲洗眼球3次。（2）沿角膜缘剪开眼球，弃掉角膜、晶体、玻璃体等部分，将眼球后半部翻转取出视网膜，将其剪碎平皿内加入

（1）麻醉及灌流：将大鼠以7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉，75%乙醇消毒后移至工作台，0.45mm头皮针连接蠕动泵，打开蠕动泵，调整蠕动泵灌流速度为7ml/min，抽取37℃预热的灌流液I并排空装置内的

培养板的包被：（1）将盖玻片裁成 12.5px×12.5px 大小，浸洗、烘干。（2）经 5%盐酸浸泡30min，自来水冲洗20min，三蒸水冲洗，浸泡过夜并烘干；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精灯烤干，放入

操作方法：（1）颈椎脱臼法处死SD大鼠后，立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下分离出大鼠股骨

实验步骤：1. 取大鼠，使用7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉，在无菌条件下迅速取出脂肪组织。 2. 用含1%青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次，剥离脂肪组织上的血管。

3. 将脂肪组织剪

实验方法 （1）将SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min，然后固定在泡沫板上，先用碘酒消毒胸腹部，再用酒精消毒。取出无菌剪刀和镊子，先用酒精棉球再次消毒，剪开胸，取心尖部位，快速置于含双抗的