小鼠肺腺癌LA795绿色荧光标记细胞BTT739小鼠肿瘤模型

小鼠肺腺癌LA795细胞系是上皮样贴壁细胞，1979年5月建系；取自T739近交系小鼠自发乳头型肺腺癌。原代培养建系，24小时细胞开始生长，首次传代45天,上皮样圆形细胞，贴壁生长 ，T739、615、KM小鼠皮下移植成功；T739小鼠肺100%转移。

T739小鼠，鼠科（Family Muridae）,小鼠属（Mus musculus），是一种土黄色近交系小鼠，是615近交系小鼠与昆明小鼠杂交后兄妹交配培育成功，经皮肤移植、生化电泳方法检测基因位点、毛色基因等指标监测符合近交小鼠标准，并已经通过鉴定。小鼠染色体C带大小存在多态性，亦即各近交系小鼠的某些对同一号染色体C带大小不同，可作为鉴别近交系小鼠以及遗传监测的一种细胞遗传学指标。

模型制作采用BTT739小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。

4.1细胞培养：LA795细胞为本实验室冻存

4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP

图1绿色荧光表达载体的构建

4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染LA795细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。

图2绿色荧光标记的LA795细胞系（200×）

稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行小鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

5.1影像分析

图3 皮下接种LA795-eGFP肿瘤生长影像分析

应用小动物活体荧光成像系统可监测到绿色荧光蛋白在小鼠皮下的稳定表达，从第1周至第4周，随着肿瘤移植时间的增加，表达绿色荧光蛋白的面积逐渐增大（图3）。